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一、原理

  細胞(bao)周期(qi)指細胞(bao)一個世代所(suo)經歷的時間。從一次細胞(bao)分裂結(jie)束到下一次分裂結(jie)束為一個周期(qi)。細胞(bao)周期(qi)反(fan)應了細胞(bao)增殖速度(du)。

單個細胞的周期測(ce)定可采用縮時(shi)攝影的方(fang)法，但(dan)它不能代表細胞群(qun)(qun)體的周期，故現多采用其他(ta)方(fang)法測(ce)群(qun)(qun)體周期。

測定(ding)細胞周期的(de)方法(fa)很多，有同位素標記(ji)法(fa)、細胞計(ji)數(shu)法(fa)等，這里介紹一種利用BrdU滲(shen)入測定(ding)細胞周期的(de)方法(fa)。

BrdU（5-溴(xiu)脫氧尿(niao)嘧啶核(he)苷）加入培養基后(hou)(hou)，可做為(wei)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)DNA復制的原料，經過兩(liang)(liang)個細(xi)(xi)胞(bao)(bao)周(zhou)(zhou)期(qi)(qi)后(hou)(hou)，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)中兩(liang)(liang)條(tiao)單(dan)鏈均(jun)含BrdU的DNA將(jiang)占l/2，反映在染(ran)(ran)色體上(shang)應表現為(wei)一(yi)條(tiao)單(dan)體淺(qian)染(ran)(ran)。如經歷(li)了(le)三個周(zhou)(zhou)期(qi)(qi)，則染(ran)(ran)色體中約一(yi)半(ban)為(wei)兩(liang)(liang)條(tiao)單(dan)體均(jun)淺(qian)染(ran)(ran)，另一(yi)半(ban)為(wei)一(yi)深一(yi)淺(qian)。細(xi)(xi)胞(bao)(bao)如果僅經歷(li)了(le)一(yi)個周(zhou)(zhou)期(qi)(qi)，則兩(liang)(liang)條(tiao)單(dan)體均(jun)深染(ran)(ran)。計分(fen)裂相(xiang)中各期(qi)(qi)比例，就可算出(chu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)周(zhou)(zhou)期(qi)(qi)的值。

二、儀器、用品與試劑

1、儀(yi)器、用品(pin)：同常規細胞(bao)培(pei)養

2、試劑：BrdU（1.0mg/ml），甲(jia)醇、冰(bing)醋酸，Giemsa染液(ye)，秋水仙(xian)素，2×SSC液(ye)

三、操作步驟

1、細胞生長至指數期(qi)時，向培養液中加入BrdU，使終濃度為10μg/ml。

2、44小時(shi)加(jia)秋水仙素，使(shi)每ml中含0.1μg。

3、48小時后常規消化細(xi)胞至離(li)心(xin)管(guan)中，注意(yi)培養(yang)上清的漂浮細(xi)胞也要收集到離(li)心(xin)管(guan)中。

4、常(chang)規染(ran)色體制片（見第三(san)部分：染(ran)色體技術）。

5、染色體玻片(pian)置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC 液(ye)，距(ju)紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。

6、棄去2×SSC液，流(liu)水沖洗。

7、Giemsa液染色10分(fen)鐘，流水沖洗，晾(liang)干。

8、鏡檢(jian)100個分裂(lie)相，計、二(er)、三、四細胞(bao)期(qi)分裂(lie)指數。

9、計算： 細(xi)胞(bao)周(zhou)期(qi)（Tc）=48/（小時）

附(fu)：（1）BrdU配制: BrdU 10mg十(shi)雙蒸水10ml 4℃下避光保存。

（2）2×SSC配制: NaCl 1.75克(ke)，檸檬酸(suan)三鈉•2H2O 0.88克(ke)，加水至100ml，4℃保(bao)存(cun)。