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怎(zen)樣選擇適(shi)合你(ni)實(shi)驗需要的抗體？

1. 一抗選擇要點

（1）確定抗體的名(ming)字，注意(yi)中英文名(ming)字、它名(ming)、亞型(xing)等信息(xi)。

（2）確定你(ni)的(de)實驗(yan)(yan)(yan)類(lei)型(xing)，Elisa，WB，IHC，ICC，還是(shi)FACS。一般抗體(ti)的(de)說(shuo)明(ming)書(shu)都會列(lie)出該抗體(ti)經驗(yan)(yan)(yan)證(zheng)過適用(yong)(yong)于何種實驗(yan)(yan)(yan)的(de)類(lei)型(xing)，如(ru)果抗體(ti)說(shuo)明(ming) 書(shu)沒(mei)有提及的(de)應用(yong)(yong)類(lei)型(xing)，并不(bu)意味著該抗體(ti)不(bu)適用(yong)(yong)于此種分析應用(yong)(yong)類(lei)型(xing)，而(er)僅是(shi)說(shuo)明(ming)尚未經過此種實驗(yan)(yan)(yan)驗(yan)(yan)(yan)證(zheng)，請根據說(shuo)明(ming)書(shu)列(lie)出的(de)已(yi)驗(yan)(yan)(yan)證(zheng)的(de)類(lei)型(xing)來選擇適合你(ni)實驗(yan)(yan)(yan)的(de) 抗體(ti)。

（3）確定實驗樣(yang)本的種屬(shu)，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體(ti)說明(ming)書(shu)都(dou)列出(chu)該抗體(ti)經(jing)試(shi)驗驗證過適用于何(he)種物(wu)種實驗，請根(gen)據說明(ming)書(shu)列出(chu)已驗證的種屬(shu)來選擇適合你實驗的抗體(ti)。

（4）樣(yang)本(ben)蛋白(bai)(bai)的結(jie)(jie)構(gou)(gou)性質(zhi)(zhi)。了(le)解樣(yang)本(ben)蛋白(bai)(bai)的結(jie)(jie)構(gou)(gou)性質(zhi)(zhi)有助于選擇(ze)最合適的抗(kang)體，待測樣(yang)本(ben)蛋白(bai)(bai)的結(jie)(jie)構(gou)(gou)域和樣(yang)本(ben)在提取(qu)和處理過程(cheng)中是否會(hui)變性，蛋白(bai)(bai)空間構(gou)(gou)象(xiang)的改變，會(hui)影(ying)響抗(kang)體的免(mian)疫親和反應。

（5）單多(duo)克(ke)隆(long)(long)(long)抗(kang)體(ti)(ti)的(de)選擇。市面上的(de)抗(kang)體(ti)(ti)還是以多(duo)克(ke)隆(long)(long)(long)抗(kang)體(ti)(ti)為主，一般單克(ke)隆(long)(long)(long)抗(kang)體(ti)(ti)特(te)(te)異性強(qiang)，但親和(he)力相(xiang)對小，檢測抗(kang)原靈敏(min)度相(xiang)對就低；而多(duo)克(ke)隆(long)(long)(long)抗(kang)體(ti)(ti)特(te)(te)異性稍弱，但抗(kang)體(ti)(ti)的(de)親和(he)力強(qiang)，靈敏(min)度高(gao)，但易出現非(fei)特(te)(te)異性染色（可以通過封閉(bi)等避免）。

2. 二抗選擇要點

（1）種屬(shu)來(lai)源。主(zhu)要根據一抗(kang)種屬(shu)來(lai)源來(lai)決定購買二抗(kang)來(lai)源，如一抗(kang)是小鼠來(lai)源，那二抗(kang)就買抗(kang)小鼠的即可（羊、兔(tu)等均可）。

（2）標記(ji)物的選擇。有HRP、Biotin、熒(ying)光(guang)(guang)(guang)素(su)等標記(ji)物。一(yi)般SP三步法二(er)抗(kang)選擇Biotin標記(ji)的二(er)抗(kang)，以(yi)與后面的SP結(jie)合反應，而(er)免疫(yi)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)染色就需要購(gou)買不同熒(ying)光(guang)(guang)(guang)素(su)標記(ji)的二(er)抗(kang)，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒(ying)光(guang)(guang)(guang)素(su)。