ELISA實驗標本收集處理事項
瀏覽次數：893發布日期：2023-07-31
做ELISA實驗，在處理樣本前應該先了解收集樣本的注意事項。
一、標本收集注意事項：
1.收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。
2.血清和血漿避免使用溶血，高血脂標本。
3.標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。
4.標本收集后若不及時檢測，需按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-80℃電冰箱內，避免反復凍融。
5.可根據標本的實際情況，做適當倍數稀釋(建議做預實驗，以確定稀釋倍數) 。
6.收集標本，盡量做到雙份的用量，避免一次實驗失敗，重復實驗時標本缺失，從而耽誤實驗進程。
7.收集標本時，應該做好防護措施(比如戴手套，口罩，護目鏡等)，認為所有標本都具有一定的潛在危險性。
8.樣本處理應該在生物安全柜里面，并且正確使用生物安全柜。
樣本正確的處理方法應該是這樣的：
二、標本處理辦法：
1.血清：將采集的全血靜置冰箱4℃過夜，然后1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
2.血漿：用EDTA，枸櫞酸鈉，肝素等作為抗凝劑，加入血液混勻后，1000-3000rpm離
心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)
保存。
3.組織勻漿：切取組織塊，0.01MPBS中過洗一次；按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例，在冰水中勻漿。勻漿完成后，5000-10000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
4.細胞培養上清：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
5.尿液，腹水，腦脊液等：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測試，暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。
注：樣品稀釋的一般原則
ELISA實驗加樣時可能遇到的問題：
1、過長(特別是室內溫度較高時)。
2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間。
3、加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外，血清或血漿標本分離不好即進行加樣。
ELISA實驗相應解決辦法：
1、標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘。
2、標本為血漿：須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘。
3、若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
4、加樣后及時放入孵箱。
5、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
6、如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
7、標本較多時，請分批操作。
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