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DOP-PCR試劑盒

  • 更新時間:  2022-08-19
  • 產品型號:  
  • 簡單描述
  • DOP-PCR試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產品, 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR 增強劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應,具有廣泛的用途。
詳細(xi)介紹

反(fan)應五要(yao)素:
參(can)加PCR反應(ying)的(de)物(wu)質主要有五種即引物(wu)、酶、dNTP、模板和Mg2
引(yin)物(wu)(wu):引(yin)物(wu)(wu)是PCR特異性(xing)反(fan)應(ying)(ying)的(de)關鍵(jian),PCR 產物(wu)(wu)的(de)特異性(xing)取決于引(yin)物(wu)(wu)與模板(ban)DNA互(hu)(hu)補的(de)程度。理論上,只要知(zhi)道任何一(yi)段模板(ban)DNA序列, 就能按(an)其設計互(hu)(hu)補的(de)寡核(he)苷酸鏈做引(yin)物(wu)(wu),利用PCR就可(ke)將模板(ban)DNA在體外大量擴增。設計引(yin)物(wu)(wu)應(ying)(ying)遵循以(yi)下原(yuan)則:
①引(yin)物長度: 15-30bp,常用為(wei)20bp左右。
②引物擴增跨(kua)度: 以200-500bp為(wei)宜,特定條件下可(ke)擴增長至(zhi)10kb的片段(duan)。
③引物堿(jian)基(ji):G C含量以40-60%為宜,G C太少擴(kuo)增效果(guo)不佳,G C過多易(yi)出現(xian)非特異條帶。ATGC隨機分布(bu),避(bi)免(mian)5個(ge)以上(shang)的嘌呤或嘧啶核苷(gan)酸的成串(chuan)排列。
④避免引物(wu)內部(bu)出現二級結構(gou),避免兩(liang)條(tiao)(tiao)引物(wu)間互補(bu),特(te)別是3'端的(de)(de)互補(bu),否則會形(xing)成引物(wu)二聚體(ti),產(chan)生非特(te)異的(de)(de)擴增(zeng)條(tiao)(tiao)帶。
⑤引物3'端的堿基(ji),特(te)別是末(mo)及倒(dao)數第二個堿基(ji),應嚴格(ge)要求配對,以(yi)避(bi)免因末(mo)端堿基(ji)不配對而(er)導致PCR失(shi)敗。
⑥引(yin)物中有(you)或(huo)能加上合適(shi)的(de)(de)酶切(qie)位點, 被擴增的(de)(de)靶序列有(you)適(shi)宜(yi)的(de)(de)酶切(qie)位點, 這對酶切(qie)分析或(huo)分子克隆很有(you)好處(chu)。
⑦引物的(de)特(te)異(yi)性:引物應與核酸序(xu)列數據(ju)庫的(de)其它(ta)序(xu)列無明顯(xian)同源性。
引(yin)物(wu)(wu)量(liang):每(mei)條(tiao)引(yin)物(wu)(wu)的(de)濃(nong)度0.1~1umol或10~100pmol,以低(di)引(yin)物(wu)(wu)量(liang)產(chan)生所需(xu)要的(de)結(jie)果為好,引(yin)物(wu)(wu)濃(nong)度偏高會引(yin)起錯配和非(fei)特(te)異性擴增,且可增加(jia)引(yin)物(wu)(wu)之間形成二聚(ju)體(ti)的(de)機會。

產品名稱

DOP-PCR試劑盒(he)

英文名稱

 

分(fen)類(lei)

PCR檢(jian)測試劑(ji)盒

特點:
高特異性:與其他病毒無交叉(cha)反應,無非特異性擴增(zeng);
高(gao)靈敏度(du)(du):檢測(ce)靈敏度(du)(du)可達(da)10~100;
操作簡便:該系列所(suo)有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
高(gao)通量:多種雙(shuang)重PCR檢(jian)測(ce)以及三重PCR檢(jian)測(ce)試劑盒。

樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chang)上大多數病(bing)毒 DNA 提取試劑盒兼(jian) 容。。也可以選購本公司(si)的一管式病(bing)毒 DNAout 或其升級版柱式病(bing)毒 DNAout。 本試劑盒免(mian)費贈(zeng)送(song) 15 次 DNA 病(bing)毒裂解液試用裝(一管式病(bing)毒 DNAout 的成分)。
稀(xi)釋(shi)陽(yang)性對(dui)(dui)照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)(wei)例。由于標準品(pin)濃度(du)非(fei)常高,因(yin)此下列稀(xi)釋(shi)操(cao)作一定要(yao)在獨(du)立的(de)區域進行,千萬不能污染樣(yang)品(pin)或本試劑盒的(de)其他成分)。為(wei)(wei)增加產品(pin)穩定性和避免擴(kuo)散傳染性病(bing)原,本產品(pin)不提供活體樣(yang)品(pin)做陽(yang)性對(dui)(dui)照,只(zhi)提供可以直接使(shi)用的(de)長為(wei)(wei) 86bp 的(de) DNA 片段作為(wei)(wei)陽(yang)性對(dui)(dui)照。
2.標記 6 個離心管,分別(bie)為(wei) 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯(xin)槍頭(tou)(tou)分別加入 45 μL 模板稀釋液(ye)(用帶芯(xin)槍頭(tou)(tou),下同)。
4.在(zai) 7 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E8 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)(xing)對照(zhao),充分(fen)(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)(fen)鐘(zhong),得(de)1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上待用。5.換槍頭,在(zai) 6 號(hao)管(guan)中加(jia)入 5 μL 1×10E7 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)(xing)對照(zhao)(上步(bu)稀釋所得(de)),充分(fen)(fen)震(zhen)蕩 1 分(fen)(fen)鐘(zhong),得(de) 1×10E6 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)(xing)對照(zhao)。放冰(bing)上待用。
6.換槍頭,在(zai) 5 號管(guan)中(zhong)加入 5 μL 1×10E6 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對照到(dao) 5 號管(guan)中(zhong),充分(fen)震(zhen)蕩(dang) 1 分(fen)鐘(zhong),得 1×10E5 拷(kao)貝(bei)/μL 的陽性對照。放(fang)冰上待用。
7.換槍頭,在(zai) 4 號管中(zhong)(zhong)加 5 μL 1×10E5 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)(xing)對(dui)照到 4 號管中(zhong)(zhong),得(de)1×10E4 拷(kao)貝/μL 的陽性(xing)(xing)對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用。8.重復(fu)上面的操(cao)作直到得(de)到 6 個(ge)稀釋度的陽性(xing)(xing)對(dui)照。放冰(bing)上待(dai)用。
?
使用及效果(guo):
PCR反應(ying)特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性(xing)決定因(yin)素為:
①引物與模板DNA特(te)異(yi)正(zheng)確的(de)結合;
②堿(jian)基配對(dui)原則;
③Taq DNA聚合酶(mei)合成反應的忠實性;
④靶(ba)基因(yin)的特(te)異性與(yu)保守性。
其中(zhong)引物(wu)與(yu)(yu)模板(ban)的(de)正確(que)結合(he)(he)(he)是關(guan)鍵。引物(wu)與(yu)(yu)模板(ban)的(de)結合(he)(he)(he)及(ji)引物(wu)鏈的(de)延伸是遵循(xun)堿基配對原則(ze)的(de)。聚合(he)(he)(he)酶合(he)(he)(he)成(cheng)反應(ying)的(de)忠實性(xing)(xing)及(ji)Taq DNA聚合(he)(he)(he)酶耐高(gao)(gao)溫性(xing)(xing),使反應(ying)中(zhong)模板(ban)與(yu)(yu)引物(wu)的(de)結合(he)(he)(he)(復性(xing)(xing))可以在較高(gao)(gao)的(de)溫度下進(jin)行(xing),結合(he)(he)(he)的(de)特異(yi)(yi)性(xing)(xing)大大增加,被擴增的(de)靶基因(yin)片段也就能(neng)保(bao)持很(hen)高(gao)(gao)的(de)正確(que)度。再通過選擇特異(yi)(yi)性(xing)(xing)和(he)保(bao)守性(xing)(xing)高(gao)(gao)的(de)靶基因(yin)區,其特異(yi)(yi)性(xing)(xing)程(cheng)度就更高(gao)(gao)。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成(cheng)量是以指數方(fang)式(shi)增(zeng)(zeng)加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(ji)的起始待測模板擴增(zeng)(zeng)到(dao)微(wei)克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xi)(xi)胞中(zhong)檢出(chu)一(yi)個靶細(xi)(xi)胞;在病毒的檢測中(zhong),PCR的靈敏度可達(da)3個RFU(空斑(ban)形成(cheng)單位);在細(xi)(xi)菌學(xue)中(zhong)zui小檢出(chu)率為(wei)3個細(xi)(xi)菌。
(3) 簡(jian)便、快速
PCR反(fan)應(ying)(ying)用(yong)耐高溫的Taq DNA聚合(he)酶(mei),一次性地將反(fan)應(ying)(ying)液加好后,即在DNA擴(kuo)增(zeng)(zeng)液和水浴鍋上(shang)進(jin)行變性-退火(huo)-延伸反(fan)應(ying)(ying),一般在2~4 小時完成(cheng)擴(kuo)增(zeng)(zeng)反(fan)應(ying)(ying)。擴(kuo)增(zeng)(zeng)產物一般用(yong)電泳(yong)分析,不(bu)一定要用(yong)同位素(su),無(wu)放射性污染(ran)、易(yi)推(tui)廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xi)菌(jun)及培養細(xi)胞,DNA 粗(cu)制(zhi)品(pin)及總(zong)RNA均可作為(wei)擴增模板。可直接(jie)用(yong)臨床標本(ben)如血液、體腔液、洗(xi)嗽液、毛(mao)發、細(xi)胞、活PCR技術概論。

polyclonal antiboy 冷凍(-20℃) 避光
兔抗CLEC1B多克隆抗體 英文名:Anti-CLEC1B rabbit polyclonal antiboy 冷凍(-20℃) 避光
兔抗CLEC4多克隆抗體 英文名:Anti-CLEC4 rabbit polyclonal antiboy 冷凍(-20℃) 避光
兔抗CLEC2多克隆抗體 英文名:Anti-CLEC2 rabbit polyclonal antiboy 冷凍(-20℃) 避光
甲基當藥寧 Methylswertianin 22172-17-4 10mg
訶子鞣質   Chebulagic acid 23094-71-5 10mg
焦袂康酸 3-hydroxy-4H-pyran-4-one  496-63-9  20mg
5-O-甲基維斯阿米醇苷 5-O-Methylvisammioside 84272-85-5 20mg
4-甲氧基水楊酸 4-Methoxysalicylic acid 2237-36-7 20mg
咖啡酸 Caffeic acid 331-39-5 20mg
柯里拉京 Corilagin 23094-69-1 20mg
熊果酸 Ursolic acid 77-52-1 20mg
齊墩果酸 Oleanic acid 508-02-1 20mg
科羅索酸 Corosolic acid 4547-24-4 20mg
山楂酸 Maslinic acid 4373-41-5 20mg
款冬酮 Tussilagone 110042-38-1 20mg
NZCYM 肉湯 250g/瓶 用于大腸桿菌菌株培養,配方被推 薦用于重組l噬菌體的復制*
 緩沖李斯特氏菌增菌肉湯基礎 250g/瓶 用于李斯特氏菌的選擇性增菌,每225ml 培養基中添加 1 支 21415*
LPM瓊脂基礎 * 100(g) 
假單胞分離瓊脂 * 250 用于假單胞菌群的測定
苯丙氨酸脫氨酶培養基    * 100 用于苯丙氨酸脫氨酶試驗
 TCBS 瓊脂 250g/瓶 用于副溶血性弧菌選擇性分離*
堿性膽鹽瓊脂 * 250(g) 
MR-VP培養基 * 250(g) 
RVS 肉湯 * 250 用于食品中沙門氏菌檢驗選擇性增菌(ISO標準)
 角質細胞培養基(特定) 500 ml* KM-d
 Littman 瓊脂基礎 250g/瓶 用于真菌的 分離培養 ,每  100ml培養基中添加 0.3g 鏈霉素*
TRITC標記的驢抗兔IgG 英文名:TRITC-conjugate onkey Anti-Rabbit IgG 冷凍(-20℃) 避光
AMCA標記的驢抗兔IgG 英文名:AMCA-conjugate onkey Anti-Rabbit IgG 冷凍(-20℃) 避光
生物素標記的驢抗兔IgG 英文名:Biotin-conjugate onkey Anti-Rabbit IgG 冷凍(-20℃) 避光
HRP標記的驢抗兔IgG 英文名:HRP-conjugate onkey Anti-Rabbit IgG 冷凍(-20℃) 避光
AP標記的驢抗兔IgG 英文名:AP-conjugate onkey Anti-Rabbit IgG 冷凍(-20℃) 避光
HRP標記的山羊抗兔IgG 英文名:HRP-conjugate Goat Anti-Rabbit IgG 冷凍(-20℃) 
HRP標記山羊抗兔IgG(免疫組化,即用型) 英文名:HRP-conjugate Goat Anti-Rabbit IgG for
FITC標記的驢抗小鼠IgG 英文名:FITC-conjugate onkey Anti-Mouse IgG 冷凍(-20℃) 避光
Cy3標記的驢抗小鼠IgG 英文名:Cy3-conjugate onkey Anti-Mouse IgG 冷凍(-20℃) 避光
TRITC標記的驢抗小鼠IgG 英文名:TRITC-conjugate onkey Anti-Mouse IgG 冷凍(-20℃) 避光
生物素標記的驢抗小鼠IgG 英文名:Biotin-conjugate onkey Anti-Mouse IgG 冷凍(-20℃) 避光
HRP標記的驢抗小鼠IgG 英文名:HRP-conjugate onkey Anti-Mouse IgG 冷凍(-20℃) 
金雀花堿 Cytisine 485-35-8 20mg
積雪草酸 Asiatic acid 464-92-6 20mg
積雪草苷 Asiaticoside 16830-15-2 20mg
羥基積雪草酸 Madecassic acid 18449-41-7 20mg
DOP-PCR試(shi)劑盒羥基積雪草苷 Madecassic acid 34540-22-2 20mg
雞II型膠原蛋白   20mg
金絲桃苷 Hyperoside  482-36-0 20mg
2”-O-沒食子酰基金絲桃苷 2”-O-Galloylhyperin 53209-27-1 20mg
金絲桃素 Hypericin 548-04-9 20mg
桔梗皂苷D Platycodin D 58479-68-8 20mg
去芹菜糖桔梗皂苷D Deapio-platycodin D 78763-58-3 10mg
桔梗皂苷元 platycodigenin 22327-82-8  20mg

 

 

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