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OV7細胞

二、細胞培(pei)養操作

1) 復蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下細(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅(jin)供參(can)考，具體操作步驟以(yi)隨貨產品說明書為(wei)主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中迅速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條件下離心3 min，棄(qi)去上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)(pei)養(yang)基后吹勻。然后將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸(xuan)(xuan)液(ye)加(jia)入含適量培(pei)(pei)養(yang)基的(de)培(pei)(pei)養(yang)瓶中培(pei)(pei)養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿中，加(jia)入約8 mL培(pei)(pei)養(yang)基，培(pei)(pei)養(yang)過夜）。第(di)二天換液(ye)并檢查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細胞(bao)密度(du)達 80%-90%，即可進行傳(chuan)代(dai)培養。

    a、棄去培養上清，用不含鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。        

    b、加1 mL消(xiao)(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使消(xiao)(xiao)化(hua)液(ye)浸潤所有細胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)于37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情況而定），然后(hou)在(zai)顯微(wei)鏡下觀(guan)察細胞(bao)消(xiao)(xiao)化(hua)情況，若細胞(bao)大(da)部分變圓并脫落(luo)，迅速拿回操作臺，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)后(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消(xiao)(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)后(hou)裝入無菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)后(hou)吹勻(yun)。        

     c、將細胞(bao)(bao)懸液按1:2比例分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿中(zhong)或者瓶中(zhong)，置于培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)(bao)凍存：待細胞(bao)(bao)生長狀態(tai)良(liang)好時，可進(jin)行細胞(bao)(bao)凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞(bao)(bao)及細胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)液，裝入無菌離心管中(zhong)，1000 rpm條件下離心4 min，棄(qi)去上清液，用PBS清洗一(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細胞(bao)(bao)計數。

     b、根據細胞(bao)數(shu)量加(jia)入無血清細胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞(bao)懸液(ye)，注意凍存(cun)管(guan)做好標識。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h后轉入液(ye)氮灌儲存(cun)。記錄凍存(cun)管(guan)位置以(yi)便下次(ci)拿取。  

三、培養注(zhu)意事項

1. 收到(dao)細胞(bao)后首(shou)先觀察細胞(bao)瓶是否(fou)完好，培(pei)養液是否(fou)有漏液、渾濁等現(xian)象，若(ruo)有上述現(xian)象 發生請及時(shi)和我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書(shu)，了解(jie)細胞相關(guan)信(xin)息，如細胞形態、所用(yong)培養基、血清比例、所需 細胞因子(zi)等，確保細胞培養條(tiao)件一致(zhi)(zhi)，若由(you)于培養條(tiao)件不一致(zhi)(zhi)而(er)導致(zhi)(zhi)細胞出現問題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自行(xing)承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下觀察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運輸問題，部(bu)分細(xi)胞(bao)由于溫度 變化及劇烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎(sui)片，是正常現象。觀察好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態后，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)(zhi)于 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi)(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可(ke)以消化，懸浮細(xi)胞(bao)直接(jie)混勻收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培(pei)(pei)(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，并(bing)接(jie)種到新的培(pei)(pei)(pei)養(yang)瓶或培(pei)(pei)(pei)養(yang)皿中，置于(yu)培(pei)(pei)(pei)養(yang)箱中進行培(pei)(pei)(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相(xiang)同條件的培養基(ji)用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細(xi)胞后前 3 天各拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞照片，記(ji)錄細(xi)胞狀態(tai)，便于和我(wo)司技(ji)術(shu)(shu)部溝通 交流。由(you)于運輸的(de)(de)原(yuan)因，個別敏感細(xi)胞會出現不穩定的(de)(de)情況(kuang)，請及時(shi)和我(wo)們聯系，告知(zhi)細(xi)胞 的(de)(de)具體情況(kuang)，以便我(wo)們的(de)(de)技(ji)術(shu)(shu)人員跟(gen)蹤回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問題解決。

7. 該細(xi)胞僅供科(ke)研使用。

8. 備注(zhu)：運(yun)輸用(yong)(yong)的培(pei)(pei)(pei)養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)(pei)(pei)養(yang)基) 不能(neng)再用(yong)(yong)來培(pei)(pei)(pei)養(yang)細胞，請換用(yong)(yong)按(an)照說(shuo)明書細胞培(pei)(pei)(pei) 養(yang)條件新配(pei)制的培(pei)(pei)(pei)養(yang)基來培(pei)(pei)(pei)養(yang)細胞。     收到(dao)細胞后第一次傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代。

9. 注(zhu)意：  1:2 傳代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿。

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